塑料袋栽培既省工，又便于管理，还能充分利用菇房空间，减少病虫害，易于栽培成功。它不仅适用于室内栽培，也适于塑料大棚、人防工程等场所栽培，这是近几年广泛采用的一种新的栽培法。首先将袋的一端7厘米左右处折迭好或用脚踩住，然后将培养料装入袋中，每筒装干料1.8~2公斤，适当压实，装至离袋口7厘米左右时，将料压平，套环后用薄膜封口，用橡皮筋或自行车内胎切剪的胶圈拴紧薄膜和套环。反之亦同。然后把装满料的料筒置于常压灶或简易灭菌灶内，在温度100℃保持10~12小时。灭菌过程要注意，温度要在内小时内战升到100℃；料筒在锅内排放时要留有空隙，以便受热均匀；灭菌中间要及时补加热水，防止锅内水烧干。当灭菌锅（灶）内的温度降至近室温时，将料袋搬入接种室。
由于量较大，通常不用接种箱或超净工作台。用紫外线照射和福尔马林熏蒸消毒，亦可用气雾消毒剂或其它消毒剂消毒。当料袋温度降至此28℃以下时可进行接种。接种人员在进入接种室之前要用肥皂或洗衣粉洗手，再用75%酒精擦手。接种用的栽培种亦用75%洒精擦抹菌种瓶（袋）的外壁。有条件的，接种人员要换鞋、工作服及工作帽。封袋口时，将原料封袋口的薄膜弃去，换上经过来菌的报纸或牛皮纸，报纸最好用2、3层，牛皮纸用一层即可。放菌种时，瓶装菌种用接种钩或镊子直接从瓶嗫出放入料袋内。若是袋装菌种，接种人员最好戴上经过消毒的胶手套，将菌袋打开，直接用手取少量菌种放入料袋。封袋口时动作要快，尽量缩短袋料暴露的时间。通常每瓶750毫升菌种瓶装的菌种可接种18袋左右（料代两头接种）。接种完后，将料袋搬进培养室进行培养。用于培养菌丝的培养场所要打扫干净，并进行必要的消毒与杀虫处理。
